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1. 以离子交换色谱法为例,简述湿法装柱的操作过程和注意事项

1、以离子交换色谱法为例,简述湿法装柱的操作过程和注意事项

先装部分液体吗，然后倒入色谱填料（色谱调料配置成悬浮液），倒的时候注意液面在填料上面，防止产生气泡。色谱柱可以适当放液，增加填料的沉积速度。

装柱时，柱高与直径的比例、离子强度都会影响分离效果，装柱需均匀分布，避免气泡产生。样品上柱时，平衡缓冲液是基础，随后均匀加入，洗脱则需要精细设计，通过分段、梯度或复合方法提高分辨率。

湿法装柱很简单。第一，塞棉花。取一小块脱脂棉（或者玻璃纤维）铺平，弄成和层析柱直径一样的圆形，放入层析柱底部，用一根较长的玻璃棒压着棉花，关闭层析柱活塞，加一点洗脱液浸润棉花，赶走棉花中的空气。

首先也是最关键的是匀浆，要根据你的填料比重找到合适的匀浆，如果是你买的填料的话一般都能要到匀浆方法。第二装柱压力，这个根据不同填料、不同内径的柱子不同。第三装后的柱头处理，很重要。

做大孔树脂时应在宽敞的容器中使树脂充分溶胀，才能装柱。用之前用乙醇洗脱至流出液与等量水混合不出现沉淀即可，然后用水冲至中性就可上样。收集样品洗脱液时应考虑柱床中的死体积。

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