离子交换树脂对核苷的纯化(离子交换树脂药物中的应用)
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1、根据分子带电性差异分离纯化生物活性物质的方法是?
根据生物分子的带电性,可以使用离子交换色谱技术来纯化。离子交换是通过电荷间的相互作用进行分离,特别适用于分析电离或能电离的化合物。
凝胶过滤法可通过凝胶分子筛的作用,将大、中、小三类分子分开。离子交换层析是利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素,吸附带有相反电荷的蛋白质抗原。
常用的蛋白质纯化方法有离子交换色谱、亲和色谱、电泳、疏水色谱等等 离子交换色谱:蛋白质和氨基酸一样会两性解离,所带电荷决定于溶液pH。pH小于pI时蛋白质带正电,pH大于pI时蛋白质带负电。
根据抗原分子电荷不同进行分离纯化的方法为离子交换层析法。
2、离子交换树脂法适宜分离
离子交换树脂的原理是利用化合物的解离度不同进行分离。主要用于分离具有酸性或碱性的成分,如有机酸、生物碱类。分离有机酸采用阴离子交换树脂,分离生物碱采用阳离子交换树脂。
生物碱和有机酸:生物碱和有机酸都带有电荷,能够与离子交换树脂结合,实现分离。
生物碱分离:离子交换树脂也可用于分离和纯化生物碱。生物碱是带正电荷的离子,可以通过与离子交换树脂中的阴离子进行交换来实现分离。盐的去除:离子交换树脂可以去除水中的无机盐,例如钠、钙、镁等离子。
生物碱和有机酸类。多糖基离子交换树脂适合生物碱和有机酸类的物质的分离。多糖基离子交换树脂固相载体是一种多糖类物质,亲水性强,交换空间大,对生物聚合物具有改性作用。
强酸型。用离子交换树脂法分离生物碱与非生物碱成分时,最好用强酸型。生物碱就是存在于自然界中的一类含氮的碱性有机物,主要是存在于植物中,常常以多种形式或结构存在。
3、离子交换柱层析的洗脱顺序是什么?
选项中Arg(pI为10.76)所带正电荷最多,与交换树脂亲和力最强,后被洗脱。Asp(pI为2.77)所带负电荷最多,与交换树脂亲和力最弱,先被洗脱。
阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,所以这类蛋白质被留在柱子上,然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施,将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。
洗脱顺序先后依次是:天冬氨酸、亮氨酸、组氨酸。原因:氨基酸与阳离子交换树脂的静电引力大小依次是 碱性氨基酸中性氨基酸酸性氨基酸,所以洗脱的顺序就先是酸性氨基酸,然后是中性氨基酸,最后是碱性氨基酸。
在柱色谱中常需要更换溶剂来梯度洗脱产物以达到分离的目的 以下是洗脱的一般步骤:先用非极性溶剂洗,一般使用石油醚,实验室合成的产物都是极性比较大的,所以洗不出来,在产物中的大分子类似于色素的东西也不会出来。
【答案】:酸性氨基酸先被洗脱。阳离子交换柱层析是一种用阳离子交换树脂作支持剂的层析法。阳离子交换树脂上含有酸性或碱性基团可以解离出氢离子,与溶液中的阳离子发生交换。
4、能不能用电泳的方法分离核酸,为什么
不同大小的核酸条带可以使用电泳法进行分离,具体方法如下: 可以使用低电压,长时间,高浓度的DNA胶,进行电泳。 可以使用相对长的电泳胶,例如15-30cm的。
电泳法:利用电泳技术将核酸从混合物中分离出来,再用某种方法将它从电泳胶中分离出来,从而获得纯化的核酸。
因磷酸基的酸性比碱基的碱性强,故其等电点偏于酸性。 利用核酸的两性解离能进行电泳,在中性或偏碱性溶液中,核 酸常带有负电荷,在外加电场力作用下,向阳极泳动。利用核 酸这一性质,可将相对分子质量不同的核酸分离。
电泳的基本原理是:生物大分子如蛋白质,核酸,多糖等大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电荷取决于介质的H 浓度或与其他大分子的相互作用。
不同的方法依据是不同的。SDS-PAGE的分离完全是靠分子量大小来分离。而只有等电聚焦分离才是依靠电荷量。对于核酸,目前都是靠分子量大小来分离的。核算带有电荷只是在电场中移动的动力来源,并不是靠电荷来分离的。
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